ABSTRACT
Criptococose é uma micose com alta morbidade e mortalidade. Oestabelecimento e progressão da doença envolve uma interação complexaentre o fungo e células hospedeiras. Este estudo teve o objetivo de buscarnovos modelos alternativos (larvas de insetos) para criptococose, selecionarcepas do complexo Cryptococcus neoformans/Cryptococcus gattii portriagem em cultura celular pela produção de óxido nítrico, IL-8 e pelacitotoxidade, determinar a suscetibilidade de duas linhagens murinas (A/Sn eBALB/c) à infecção e analisar no modelo mais suscetível a virulência (cargafúngica, sobrevida e histopatológico) e a resposta imunológica porrecrutamento de células T (CD3+, CD4+ e CD8+), células B, granulócitos emacrófagos, ou por produção de citocinas Th1 (IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6) eTh2 (IL-4 e IL-10). Os modelos invertebrados estudados foram Apis melliferae Zophobas morio em fase larval. As larvas foram inoculadas com cepapadrão de C. neoformans e sobrevivência foi registrada, diariamente. Larvasforam eutanasiadas periodicamente e colônias foram analisadas pela técnicaPCR fingerprinting com primer M13, para determinação molecular desimilaridade. A linhagem murina mais sucetível foi BALB/c, para estudo emcepas produtoras de células titans foram selecionados três isoladosresultantes de alta secreção de IL-8, e inoculados para quantificação decarga fúngica e histopatológico aos 14 e 21 dias. Para estudo em cepatolerante a AmB foram selecionadas subpopulações tolerantes das cepasH99 e R265, e inoculadas em BALB/c, para produção de citocinas Th1 e Th2e virulência aos 7, 14 e 21 dias. Larvas de Apis mellifera foram suscetíveis ainfecção por C. neoformans, diferentemente, larvas de Zophobas morioapresentaram desenvolvimento biológico normal e 100% de sobrevida até ofinal do experimento...
Cryptococcosis, a life-threatening fungal disease. Establishment andprogression of disease involves a complex interplay between the fungus anda diverse range of host cell types. The aim this study was to evaluate strainsof the complex species C. neoformans/C. gattii in murine model and in 2 newalternative model invertebrate. In first step, We evaluated the virulence of theCryptococcus spp. strains at screening in cell culture human and murine, therelease of the inflammatory cytokine IL-8 and host cell damage were adoptedfor analyze the activation of the cell line. To study strains produce titans cells,we select 2 clinical isolates and strain type H99 resulting high release of IL-8to inoculated BALB/c mice aiming to analyze titan cell production andimmune responses of T-cells (CD3+, CD4+ and CD8+), B-cells, granulocytesand macrophages. We quantified the cryptococcal burden (CFUs/mL) in thelungs and brains at 14 and 21 days. To study tolerant strain to amphotericinB we select 2 strains strain type H99 and IAL 3238, inoculated in two murineBALB/c and A/Sn, the progression of cryptococcosis was assessed byquantification of fungal burden and histopathology analysis after 7, 14 and 21days. The invertebrate models studied were Apis mellifera and Zophobasmorio in larval stage. The larvae were inoculate with strain type of C.neoformans and survival was recorde daily for up to 96 hours to Apismellifera and Zophobas morio to adulthood. Larvae were euthanizeperiodically and colonies were analyze by polymerase chain reaction (PCR)fingerprinting with M13 primer for molecular determination of similarity.Larvae of Apis mellifera were susceptible to infection with C. neoformans, bycontrast, larvae Zophobas morio had normal biological development and100% survival to the end of the experiment...